Introducción
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
- Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta, safranina.
- Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina, nigrosina.
- Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
- Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
- Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan más de un colorante.
- Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos. Pueden utilizarse uno o más colorantes.
a) Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.
b) Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no penetra en el
interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño celulares al observarse los
microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro.
Objetivos
- Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.
- Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.
- Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
- Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.
MATERIAL
- Mechero Bunsen o de alcohol
- Asa de siembra o aguja ebmangada
- Pinzas
- Portaobjetos
- Muestras bacterians de origen natural: yogurt, vinagre, sarro dental, suelo,etc.
- Colorantes para tinción:
- a) Solución de cristal violeta al 1%
- b) Solución de safranina al 0.5%
- c) Azul de metileno al 1%
- Microscopio y aceite de inmersión
BACTERIAS DEL YOGURT
Procedimiento
- Extension: Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.
- Fijación Fijar con metanol o Xilol para eliminar parte de la grasa.
- Teñir Apoyar el portaobjetos sobre el soporte de tinciones y añadir unas gotas de azul de metileno o con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 4-5 minutos.
- Lavar con agua destilada
- Secar. pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
- añadir una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos
- Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×
Resultados
Contestar las siguientes preguntas:
1) El yogur es un alimento más fácilmente digerible que la leche, ¿por qué?
R/. Es debido a que los cultivos de bacterias que contiene el yogur rompen las cadenas de lactosa y la hacen mas facil de digerir. el proceso de hacer yogur tambien modifica las proteínas de la leche haciendolas mas digerible. 2) En casos de intolerancia a la lactosa, ¿qué alimento será más fácilmente tolerado, la leche o el yogur? ¿Por qué?
R/. El yogur, porque es un derivado de la leche y se elabora mediante la fermentación bacteriana de leche que transforma a los azucares en ácidos, así la lactosa se convierte en ácido láctico. El menor contenido de lactosa del yogur con respecto a la leche, hace que sea mejor tolerado por quienes no consumen leche habitualmente y ademas, permite comenzar a tolerar la lactosa. 3) ¿Qué papel desempeña cada una de estas bacterias en la formación del yogur a partir de la leche?
R/. Tanto Lactobacillus bulgaris como Streptococcus thermophilus realizan la fermentación del ácido lactico. Transforman los azucares presentes en la leche (lactosa formada por glucosa y galactosa) en ácido lactico. se trata de un proceso anaerobico que confiere acidez al yogur.
4) ¿Qué otros procesos conoces en que se empleen bacterias para la elaboración de algún producto alimenticio?
Proceso | Organismo | Papel en proceso | molécula original | Producto final |
Fabricación de la cerveza | Saccharomyces cerevisidae(levadura) | Fermentación alcohólica y carbonatación | Glucosa i/o fructosa | Etanol +CO2 |
F. del pan | S. cerevisidae | Fermentación y carbonatación | Azucar | Co2 |
F. del vinagre | Bacterias del ácido acético | Oxidación aerobios estrictos | Alcohol (etanol) | Acido acético |
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.
- Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado.
- Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
- Dejar secar y fijar con calor.
- Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
- Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
- Dejar secar y fijar con calor.
- Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prácticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbiólogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín. Después de varios días, las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, así como la parte que no se va a teñir.
Preguntas:
1) ¿ Cuales son las distintas formas y asociaciones que pueden presentar las bacterias? Explicarlas y haz un dibujo esquemático de cada una de ellas.
2) Enumera 5 diferencias entre las bacterias y otros tipos de células.
Características | Procariotas | Eucariotas |
Tamaño | de 0,5 micras a 2 micras | de 2 a 200 micras |
membrana nuclear | sin membrana. No hacen mitosis | Con membrana. Hacen mitosis |
Orgánulos | Ribosomas y mesosomas | Ribosomas, mitocondrias, vacuolas, etc sin mesosomas |
ADN | Una molécula. Sin cromosomas | De una a varias moléculas. Forman cromosomas |
Movimiento | Flagelos de estructura simple | Cilios y flagelos de estructura compleja |
Pared celular | Delgada y de peptidoglicano | Sólo la presentan los vegetales (celulosa), los hongos (quitina) |
Conclusión
Durante este experimento pudimos observar las diferentes formas que tienen las bacterias.
La mayoría de los enterococos, estreptococos y demás grupos o genero microbianos son algunos patógenos y no patógenos, de estos se pueden preparar fermentaciones, que mediante un largo proceso,llegan a ser elaboradas en productos comestibles, garantizando la mayor seguridad al consumir ese producto fermentado.
